從誕生到現在，顯微鏡yijingchengweigegeyanjiulingyudeshiyonggongju

，weijibingyanjiuhecailiaojiancetigongleyoulidebangzhu。zaixianweijingxia，biaobenbingbuzongshihenrongyiguancha。yanjiuweiransedexijun、薄組織切片、活細胞等低對比度標本，如果改變觀察方法，往往可以解決問題。

　　但是你知道嗎?常見的顯微鏡觀察方法多達七種(使用的材料有五種)。接下來西安蔡司君老師就給大家講解一下不同的方法在哪裏
，應該如何選擇。

　　01

　　明場 (BF)

　　明場成像是最常用的顯微鏡觀察方法，也是觀察生物樣品和材料樣品最常用的觀察方法。您在顯微鏡下看到的第一個明場圖像是什麼?應該是生物課透射明場下紫洋蔥的表皮細胞!

　　生(sheng)物(wu)研(yan)究(jiu)中(zhong)常(chang)用(yong)的(de)免(mian)疫(yi)組(zu)化(hua)染(ran)色(se)也(ye)是(shi)明(ming)場(chang)成(cheng)像(xiang)。根(gen)據(ju)不(bu)同(tong)的(de)標(biao)注(zhu)方(fang)式(shi)，樣(yang)品(pin)會(hui)呈(cheng)現(xian)不(bu)同(tong)的(de)顏(yan)色(se)。抗(kang)體(ti)標(biao)記(ji)或(huo)染(ran)料(liao)也(ye)可(ke)用(yong)於(yu)區(qu)分(fen)不(bu)同(tong)的(de)成(cheng)分(fen)。

　　在下麵的 HE 中
，細胞核被標記為藍色
，細胞質被染為粉紅色。

　　▲HE染色和TMA標本中的DAB染色

　　這種方法簡單、有效且成本低。但由於標記成分數量有限
，應用範圍不廣
，對比不明顯，無法判斷陽性結果。

　　guanchabutoumingcailiaoyangpin，fanshemingchangshizuichangyongdeguanchafangfa。guangyuanzhijiezhaosheyangpinbiaomian
，biaomianjiegouduizhaosheguangjinxingbutongchengdudefanshehexishou。tuxiangdeliangdufanyingleyangpinbiaomiandecucaoduhexiguanglv。

　　下圖是反射明場觀察法的結構和明場中純鋁的圖像。通過明場圖像，可以清楚地獲得純鋁晶粒的大小和形狀。

　　▲反射明場結構示意圖

　　▲ 純鋁明場圖像

　　02

　　暗場 (DF)

　　暗an場chang成cheng像xiang對dui應ying於yu明ming場chang成cheng像xiang。顧gu名ming思si義yi
，人ren們men並bing不bu直zhi接jie觀guan察cha照zhao明ming光guang，而er是shi將jiang光guang斜xie射she在zai試shi樣yang表biao麵mian。根gen據ju廷ting德de爾er現xian象xiang，粒li子zi反fan射she或huo衍yan射she斜xie光guang，增zeng加jia隻zhi有you人ren眼yan的de可ke見jian度du
，我wo們men才cai能neng觀guan察cha到dao極ji小xiao的de物wu體ti。

　　▲透射暗場成像光路原理

　　那麼如何實現暗場成像呢?通tong過guo顯xian微wei鏡jing的de橫heng截jie麵mian圖tu，我wo們men可ke以yi看kan到dao聚ju光guang鏡jing將jiang一yi束shu光guang以yi一yi定ding的de高gao度du角jiao對dui準zhun標biao本ben上shang
，使shi部bu分fen光guang線xian不bu會hui直zhi接jie進jin入ru物wu鏡jing。穿chuan過guo樣yang品pin的de光guang線xian被bei光guang學xue不bu連lian續xu性xing(如細胞膜、細胞核和內部細胞器)衍射、反射和折射，然後再次進入物鏡，然後樣品在黑色上可以被看作是一個明亮的物體背景。

　　澤斯先生，通過幾張圖，帶你了解暗場中的微觀世界。

　　▲ 透射暗場觀察到的標本圖像：水蚤
、寄生蟲
、水蝸牛、花粉粒

　　一般來說
，暗場適合觀察微小顆粒、細菌形態、細菌數量、透明標本等
，可以看到標本的精細結構。

　　不幸的是，物體散射的光會影響成像

，從而降低對比度並模糊標本的細節。同時
，試樣中的灰塵和碎屑也會對生成的圖像產生影響。

　　此(ci)外(wai)
，較(jiao)薄(bo)的(de)貼(tie)壁(bi)細(xi)胞(bao)通(tong)常(chang)信(xin)號(hao)較(jiao)弱(ruo)，而(er)較(jiao)厚(hou)的(de)植(zhi)物(wu)和(he)動(dong)物(wu)組(zu)織(zhi)會(hui)將(jiang)過(guo)多(duo)的(de)光(guang)線(xian)重(zhong)定(ding)向(xiang)到(dao)物(wu)鏡(jing)中(zhong)，這(zhe)會(hui)降(jiang)低(di)成(cheng)像(xiang)的(de)對(dui)比(bi)度(du)，因(yin)此(ci)暗(an)場(chang)成(cheng)像(xiang)需(xu)要(yao)更(geng)高(gao)的(de)標(biao)本(ben)。 .

　　觀察材料樣品的暗場結構與生物的暗場結構略有不同(見左下圖)。反射光暗場可反射樣品表麵的超細結構，可觀察到小至0.004umdejiegou。raner
，youyuweixiaojiegoudeguangsanshehuoyanshe
，zaianchangzhongwufajinxingzhunquedeceliang，yincianchangjinshiyongyuguancha，yongyuyixiechaoxijiegouhequexiandedingwei。dangran，fansheguanganchanghaiyouyigexiaoyongtu，keyidedaotouminghuobantoumingcailiaodeyanse，biruPCB板的綠油、鏽色等。