中山蔡司激光中山共聚焦顯微鏡作為生命科學實驗最常用的儀器之一，幾乎會出現在每個生命科學研究者的“ Materials and Methods ”中。中山蔡司激光中山共聚焦顯微鏡 LSM 7/8/9 係列以其高質量的成像結果深受生命科學科研工作者的喜愛，成為了蔡司的“明星產品”。

　　隨著科研手段的不斷升級
，激光中山共聚焦顯微鏡也在不斷滿足我們越來越多的多維成像需求。但是，我們在實際操作時，難免會因為樣品 “罷工”，遇到一些抓狂時刻：

　　三維重構時發現關鍵層缺失

　　大圖拚接有拚縫/陰影

　　時間序列拍攝時發現熒光信號越來越弱

　　今天蔡司君帶您解鎖激光中山共聚焦顯微鏡在進行多維成像時，設置不同掃描策略的技巧。

　　三維重構策略：Z-Stack

　　① 選擇Z軸掃描的範圍。軟件中提供了 First/Last 和Center 兩種不同的設定模式。其中
，First/Last，可以更直觀的確定樣品的上/下表麵，保證拍攝範圍的完整性;Center 模式，將感興趣的信號設置在 Z 軸的中心。兩種設定模式可以根據實際需求靈活選擇

　　② Z軸步進。如果對重構結果Z軸視角有更高的精度需求，我們可以點擊 Optimal 使用係統推薦步進
，獲得更好的重構效果;如需減少漂白/加快速度
，我們也可在Interval 輸入合適的數值;當我們設置的 Interval>Optimal 的 2 倍，則有可能出現上述提到的關鍵層缺失問題

　　③ 亮度矯正。對於一些比較厚的樣品，拍攝時可能發生拍得越深亮度越暗的現象，這時可以使用 Auto Z Brightness Correction，對於物鏡遠端的樣品給予更高的laser power 和Master Gain

　　④ 速度優化。對於多色樣品三維重構，使用 Full Z-stack per Track 采集順序，可提高整體采集速度哦

　　⑤ 拍攝結果。軟件左側工具欄

，3D 功能可以查看或導出渲染結果;Ortho 則可以獲取更大強度投影

　　大圖拚接策略：Tiles

　　① 對於焦麵不一致的圖像拚接，可調用 Focus Surface and Support Point 功能

　　② 拚縫是拚圖中的正常現象，我們拚圖設置會默認tile之間存在 10% 的 overlap。拚圖後，使用 Stitching 功能，軟件會幫我們一鍵消除拚縫

　　③ 如果拍攝結果出現規律的陰影，可使用軟件的陰影矯正功能。(先 Shading reference for processing 提取陰影，後在 Stitching 中進行 Correct Shading，並在 Reference 中勾選上一步提取的 Shading 文件)

　　時間序列策略：Time series

　　① 設置拍攝時長。根據實驗需要輸入合適的循環數，或總體拍攝時間

　　② 設置合適的間隔時間。即 Interval(間隔時間包含拍照的時間)

　　③ 選擇對焦策略。在 Focus Strategy 中選擇 Software Autofocus / Definite Focus

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