從誕生到現在，顯微鏡已yi經jing成cheng為wei各ge個ge研yan究jiu領ling域yu的de實shi用yong工gong具ju，為wei疾ji病bing研yan究jiu和he材cai料liao檢jian測ce提ti供gong了le有you力li的de幫bang助zhu。在zai顯xian微wei鏡jing下xia，標biao本ben並bing不bu總zong是shi很hen容rong易yi觀guan察cha。研yan究jiu未wei染ran色se的de細xi菌jun、薄組織切片、活細胞等低對比度標本，如果改變觀察方法，往往可以解決問題。

　　但是你知道嗎?常見的顯微鏡觀察方法多達七種(使用的材料有五種)。接下來中山蔡司君老師就給大家講解一下不同的方法在哪裏
，應該如何選擇。

　　01

　　明場 (BF)

　　明場成像是最常用的顯微鏡觀察方法
，也是觀察生物樣品和材料樣品最常用的觀察方法。您在顯微鏡下看到的第一個明場圖像是什麼?應該是生物課透射明場下紫洋蔥的表皮細胞!

　　生(sheng)物(wu)研(yan)究(jiu)中(zhong)常(chang)用(yong)的(de)免(mian)疫(yi)組(zu)化(hua)染(ran)色(se)也(ye)是(shi)明(ming)場(chang)成(cheng)像(xiang)。根(gen)據(ju)不(bu)同(tong)的(de)標(biao)注(zhu)方(fang)式(shi)
，樣(yang)品(pin)會(hui)呈(cheng)現(xian)不(bu)同(tong)的(de)顏(yan)色(se)。抗(kang)體(ti)標(biao)記(ji)或(huo)染(ran)料(liao)也(ye)可(ke)用(yong)於(yu)區(qu)分(fen)不(bu)同(tong)的(de)成(cheng)分(fen)。

　　在下麵的 HE 中
，細胞核被標記為藍色，細胞質被染為粉紅色。

　　▲HE染色和TMA標本中的DAB染色

　　這種方法簡單
、有效且成本低。但由於標記成分數量有限，應用範圍不廣，對比不明顯
，無法判斷陽性結果。

　　觀(guan)察(cha)不(bu)透(tou)明(ming)材(cai)料(liao)樣(yang)品(pin)
，反(fan)射(she)明(ming)場(chang)是(shi)最(zui)常(chang)用(yong)的(de)觀(guan)察(cha)方(fang)法(fa)。光(guang)源(yuan)直(zhi)接(jie)照(zhao)射(she)樣(yang)品(pin)表(biao)麵(mian)，表(biao)麵(mian)結(jie)構(gou)對(dui)照(zhao)射(she)光(guang)進(jin)行(xing)不(bu)同(tong)程(cheng)度(du)的(de)反(fan)射(she)和(he)吸(xi)收(shou)。圖(tu)像(xiang)的(de)亮(liang)度(du)反(fan)映(ying)了(le)樣(yang)品(pin)表(biao)麵(mian)的(de)粗(cu)糙(cao)度(du)和(he)吸(xi)光(guang)率(lv)。

　　下圖是反射明場觀察法的結構和明場中純鋁的圖像。通過明場圖像，可以清楚地獲得純鋁晶粒的大小和形狀。

　　▲反射明場結構示意圖

　　▲ 純鋁明場圖像

　　02

　　暗場 (DF)

　　暗(an)場(chang)成(cheng)像(xiang)對(dui)應(ying)於(yu)明(ming)場(chang)成(cheng)像(xiang)。顧(gu)名(ming)思(si)義(yi)

，人(ren)們(men)並(bing)不(bu)直(zhi)接(jie)觀(guan)察(cha)照(zhao)明(ming)光(guang)，而(er)是(shi)將(jiang)光(guang)斜(xie)射(she)在(zai)試(shi)樣(yang)表(biao)麵(mian)。根(gen)據(ju)廷(ting)德(de)爾(er)現(xian)象(xiang)，粒(li)子(zi)反(fan)射(she)或(huo)衍(yan)射(she)斜(xie)光(guang)，增(zeng)加(jia)隻(zhi)有(you)人(ren)眼(yan)的(de)可(ke)見(jian)度(du)
，我(wo)們(men)才(cai)能(neng)觀(guan)察(cha)到(dao)極(ji)小(xiao)的(de)物(wu)體(ti)。

　　▲透射暗場成像光路原理

　　那麼如何實現暗場成像呢?tongguoxianweijingdehengjiemiantu，womenkeyikandaojuguangjingjiangyishuguangyiyidingdegaodujiaoduizhunbiaobenshang，shibufenguangxianbuhuizhijiejinruwujing。chuanguoyangpindeguangxianbeiguangxuebulianxuxing(如細胞膜
、細胞核和內部細胞器)衍射
、反射和折射，然後再次進入物鏡，然後樣品在黑色上可以被看作是一個明亮的物體背景。

　　澤斯先生
，通過幾張圖，帶你了解暗場中的微觀世界。

　　▲ 透射暗場觀察到的標本圖像：水蚤、寄生蟲
、水蝸牛

、花粉粒

　　一般來說
，暗場適合觀察微小顆粒
、細菌形態、細菌數量、透明標本等，可以看到標本的精細結構。

　　不幸的是，物體散射的光會影響成像，從而降低對比度並模糊標本的細節。同時，試樣中的灰塵和碎屑也會對生成的圖像產生影響。

　　此(ci)外(wai)
，較(jiao)薄(bo)的(de)貼(tie)壁(bi)細(xi)胞(bao)通(tong)常(chang)信(xin)號(hao)較(jiao)弱(ruo)，而(er)較(jiao)厚(hou)的(de)植(zhi)物(wu)和(he)動(dong)物(wu)組(zu)織(zhi)會(hui)將(jiang)過(guo)多(duo)的(de)光(guang)線(xian)重(zhong)定(ding)向(xiang)到(dao)物(wu)鏡(jing)中(zhong)，這(zhe)會(hui)降(jiang)低(di)成(cheng)像(xiang)的(de)對(dui)比(bi)度(du)

，因(yin)此(ci)暗(an)場(chang)成(cheng)像(xiang)需(xu)要(yao)更(geng)高(gao)的(de)標(biao)本(ben)。 .

　　觀察材料樣品的暗場結構與生物的暗場結構略有不同(見左下圖)。反射光暗場可反射樣品表麵的超細結構
，可觀察到小至0.004um的(de)結(jie)構(gou)。然(ran)而(er)，由(you)於(yu)微(wei)小(xiao)結(jie)構(gou)的(de)光(guang)散(san)射(she)或(huo)衍(yan)射(she)，在(zai)暗(an)場(chang)中(zhong)無(wu)法(fa)進(jin)行(xing)準(zhun)確(que)的(de)測(ce)量(liang)，因(yin)此(ci)暗(an)場(chang)僅(jin)適(shi)用(yong)於(yu)觀(guan)察(cha)，用(yong)於(yu)一(yi)些(xie)超(chao)細(xi)結(jie)構(gou)和(he)缺(que)陷(xian)的(de)定(ding)位(wei)。當(dang)然(ran)，反(fan)射(she)光(guang)暗(an)場(chang)還(hai)有(you)一(yi)個(ge)小(xiao)用(yong)途(tu)
，可(ke)以(yi)得(de)到(dao)透(tou)明(ming)或(huo)半(ban)透(tou)明(ming)材(cai)料(liao)的(de)顏(yan)色(se)，比(bi)如(ru)PCB板的綠油、鏽色等。