從誕生到現在，顯微鏡已yi經jing成cheng為wei各ge個ge研yan究jiu領ling域yu的de實shi用yong工gong具ju，為wei疾ji病bing研yan究jiu和he材cai料liao檢jian測ce提ti供gong了le有you力li的de幫bang助zhu。在zai顯xian微wei鏡jing下xia
，標biao本ben並bing不bu總zong是shi很hen容rong易yi觀guan察cha。研yan究jiu未wei染ran色se的de細xi菌jun、薄組織切片、活細胞等低對比度標本，如果改變觀察方法，往往可以解決問題。

　　但是你知道嗎?常見的顯微鏡觀察方法多達七種(使用的材料有五種)。接下來西安蔡司君老師就給大家講解一下不同的方法在哪裏
，應該如何選擇。

　　01

　　明場 (BF)

　　明場成像是最常用的顯微鏡觀察方法

，也是觀察生物樣品和材料樣品最常用的觀察方法。您在顯微鏡下看到的第一個明場圖像是什麼?應該是生物課透射明場下紫洋蔥的表皮細胞!

　　生sheng物wu研yan究jiu中zhong常chang用yong的de免mian疫yi組zu化hua染ran色se也ye是shi明ming場chang成cheng像xiang。根gen據ju不bu同tong的de標biao注zhu方fang式shi
，樣yang品pin會hui呈cheng現xian不bu同tong的de顏yan色se。抗kang體ti標biao記ji或huo染ran料liao也ye可ke用yong於yu區qu分fen不bu同tong的de成cheng分fen。

　　在下麵的 HE 中
，細胞核被標記為藍色
，細胞質被染為粉紅色。

　　▲HE染色和TMA標本中的DAB染色

　　這種方法簡單、有效且成本低。但由於標記成分數量有限
，應用範圍不廣，對比不明顯
，無法判斷陽性結果。

　　觀guan察cha不bu透tou明ming材cai料liao樣yang品pin，反fan射she明ming場chang是shi最zui常chang用yong的de觀guan察cha方fang法fa。光guang源yuan直zhi接jie照zhao射she樣yang品pin表biao麵mian
，表biao麵mian結jie構gou對dui照zhao射she光guang進jin行xing不bu同tong程cheng度du的de反fan射she和he吸xi收shou。圖tu像xiang的de亮liang度du反fan映ying了le樣yang品pin表biao麵mian的de粗cu糙cao度du和he吸xi光guang率lv。

　　下圖是反射明場觀察法的結構和明場中純鋁的圖像。通過明場圖像
，可以清楚地獲得純鋁晶粒的大小和形狀。

　　▲反射明場結構示意圖

　　▲ 純鋁明場圖像

　　02

　　暗場 (DF)

　　anchangchengxiangduiyingyumingchangchengxiang。gumingsiyi，renmenbingbuzhijieguanchazhaomingguang
，ershijiangguangxieshezaishiyangbiaomian。genjutingdeerxianxiang
，lizifanshehuoyanshexieguang
，zengjiazhiyourenyandekejiandu
，womencainengguanchadaojixiaodewuti。

　　▲透射暗場成像光路原理

　　那麼如何實現暗場成像呢?通(tong)過(guo)顯(xian)微(wei)鏡(jing)的(de)橫(heng)截(jie)麵(mian)圖(tu)

，我(wo)們(men)可(ke)以(yi)看(kan)到(dao)聚(ju)光(guang)鏡(jing)將(jiang)一(yi)束(shu)光(guang)以(yi)一(yi)定(ding)的(de)高(gao)度(du)角(jiao)對(dui)準(zhun)標(biao)本(ben)上(shang)，使(shi)部(bu)分(fen)光(guang)線(xian)不(bu)會(hui)直(zhi)接(jie)進(jin)入(ru)物(wu)鏡(jing)。穿(chuan)過(guo)樣(yang)品(pin)的(de)光(guang)線(xian)被(bei)光(guang)學(xue)不(bu)連(lian)續(xu)性(xing)(如細胞膜、細胞核和內部細胞器)衍射

、反射和折射，然後再次進入物鏡，然後樣品在黑色上可以被看作是一個明亮的物體背景。

　　澤斯先生，通過幾張圖，帶你了解暗場中的微觀世界。

　　▲ 透射暗場觀察到的標本圖像：水蚤、寄生蟲、水蝸牛
、花粉粒

　　一般來說，暗場適合觀察微小顆粒
、細菌形態
、細菌數量
、透明標本等，可以看到標本的精細結構。

　　不幸的是，物體散射的光會影響成像，從而降低對比度並模糊標本的細節。同時

，試樣中的灰塵和碎屑也會對生成的圖像產生影響。

　　此ci外wai
，較jiao薄bo的de貼tie壁bi細xi胞bao通tong常chang信xin號hao較jiao弱ruo，而er較jiao厚hou的de植zhi物wu和he動dong物wu組zu織zhi會hui將jiang過guo多duo的de光guang線xian重zhong定ding向xiang到dao物wu鏡jing中zhong，這zhe會hui降jiang低di成cheng像xiang的de對dui比bi度du，因yin此ci暗an場chang成cheng像xiang需xu要yao更geng高gao的de標biao本ben。 .

　　觀察材料樣品的暗場結構與生物的暗場結構略有不同(見左下圖)。反射光暗場可反射樣品表麵的超細結構，可觀察到小至0.004um的de結jie構gou。然ran而er，由you於yu微wei小xiao結jie構gou的de光guang散san射she或huo衍yan射she，在zai暗an場chang中zhong無wu法fa進jin行xing準zhun確que的de測ce量liang
，因yin此ci暗an場chang僅jin適shi用yong於yu觀guan察cha，用yong於yu一yi些xie超chao細xi結jie構gou和he缺que陷xian的de定ding位wei。當dang然ran，反fan射she光guang暗an場chang還hai有you一yi個ge小xiao用yong途tu，可ke以yi得de到dao透tou明ming或huo半ban透tou明ming材cai料liao的de顏yan色se
，比bi如ruPCB板的綠油、鏽色等。